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Analyses de légionnelles en milieu biologique complexe

Projet innovant

L'évolution, des bactéries est un problème important pour le biologiste, dans la mesure où les méthodes d'analyses habituelles peuvent conduire à des interprétations erronées des résultats. Les modifications des normes, censées tenir compte de ces problèmes, ne sont pas toujours de nature à lever le

Nous souhaitons identifier et quantifier les bactéries de l'environnement et en particulier la Legionella spp. en milieu biologique complexe suivant différentes approches :

Procédures normées (AFNOR) servant de référence. Emploi de la PCR (amplification génique in vitro) en temps réel (un projet de norme est actuellement à l'étude) pour identifier les légionelles à partir de :

1) des cultures sur milieu sélectif spécifique,

2) des cultures sur des milieux non spécifiques,

3) des co cultures bactériennes (prélèvements totaux)

4) des extrait d'ADN total d'un échantillonnage biologique sans pré culture.

A cette technique moléculaire, sera couplée l'identification des différentes espèces de légionelles par SSCP-PCR (Single Strain Conformation Polymorphisme – PCR), méthode expérimentale de laboratoire en cours de développement pour d'autres espèces de pathogène telle que Listéria par l'AFSSA à partir d'échantillonnages sur les produits manufacturés d'IAA.

Une quatrième dimension, novatrice, est d'utiliser la résolution spectrale qu'offre la spectrométrie de masse MALDI - ToF. En effet, cette méthode permet la réalisation de spectre de masse de déterminants macromoléculaires désorbés des membranes bactériennes, dont la composition relative est spécifique d'une espèce. L'analyse comparative de ces différentes techniques et méthodes permettra d'évaluer, en fonction de l'échantillon biologique à analyser, l'emploi de la méthode la plus résolutive et la plus adaptées aux échantillons des industriels.



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